小鼠腫瘤壞死因子α（TNF-α）ELISA試劑盒

本產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究，非診斷試劑，不能用于臨床診斷。

試驗(yàn)原理：本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）
二、產(chǎn)品性能：

1）物理性能

試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝，無破損漏氣。

2) 劑量反應(yīng)曲線線性

 標(biāo)準(zhǔn)品劑量反應(yīng)曲線相關(guān)系數(shù)r值，大于等于0.99。

3) 精密度

 批內(nèi)精密度：三組已知的高、中、低濃度樣品，進(jìn)行二十次在不同板塊內(nèi)精度評(píng)估。批內(nèi)變異系數(shù)CV%小于8%。

批間精密度：三組已知的高、中、低濃度樣品，進(jìn)行二十次在不同板塊內(nèi)精度評(píng)估。批間變異系數(shù)CV%小于12%。

4) 特異性

 本試劑盒識(shí)別天然和重組人白細(xì)胞介素6（IL-6）。

 5) 穩(wěn)定性

 注意事項(xiàng)

2℃-8℃保存，有效期6個(gè)月。

 三、樣本收集：

細(xì)胞培養(yǎng)上清

2000 × g條件下離心20m分鐘，去除細(xì)胞顆粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反復(fù)凍融。

血清樣本

離心管收集血清。血樣凝集 30 分鐘后，2000 × g 離心 10 分鐘。吸取血清樣本之后即刻檢測(cè)，或者分裝，-20℃以下貯存，避免反復(fù)凍融。

血漿樣本

EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝收集血漿樣本。2000 × g 離心 20 分鐘收集樣本。即刻檢測(cè)， 或者分裝，-20℃以下貯存，避免反復(fù)凍融。

組織樣本

用預(yù)冷的PBS (0.01 M,pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液，稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS(般按1: 9的重量體積比，比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9 mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推 jian在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中，在冰上充分研磨。為了進(jìn)步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻 漿液進(jìn)行超聲破碎或反復(fù)凍融。后將勻漿液5000×g離心 5-10分鐘，取上清檢測(cè)。

細(xì)胞提取液樣本

貼壁細(xì)胞用冷的PBS輕輕清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g離心5分鐘后收集細(xì)胞；懸浮  細(xì) 胞可直接離心收集。收集的細(xì)胞用冷的PBS 洗滌3次。每 1×106 個(gè)細(xì)胞中加入150-200μL PBS重懸并通過反 復(fù)凍融使細(xì)胞破碎(若含量很低可減少PBS的體積)。將提取液于1500×g離心10分鐘，取上清檢測(cè)。

注意：1）避免樣本的反復(fù)凍融，在檢測(cè)，冷凍樣本應(yīng)緩慢地恢復(fù)至室溫，輕柔混勻。  2）本試劑盒可能適用于其它生物學(xué)樣本，但是未充分驗(yàn)證。

      四、產(chǎn)品功能：

1） 試劑、樣本平衡：檢測(cè)之請(qǐng)將所有的試劑、樣本平衡至室溫，標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品，建議

做復(fù)孔。

配置工作液：按面試劑準(zhǔn)備中描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。

2） 加標(biāo)準(zhǔn)品、樣本：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL，

樣本孔加待測(cè)樣本50μL，空白孔不加。

3） 加 HRP標(biāo)記抗體：除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體

100μL。

4） 孵育：使用封板膜封板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60分鐘。

5） 洗滌：棄掉液體，每孔加入300μL洗液洗板，靜置20s，洗滌5次。每次洗板，在吸水紙上拍  干。為獲得理想的實(shí)驗(yàn)性能，必須徹底移除殘留液體。

6） 加底物顯色：每孔加入50μL顯色底物A、B 各50μL，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15分鐘。

7） 加終止液：每孔加入50μL終止液。顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色。如果顏色呈現(xiàn)綠色或者顏色的變化   明顯不均勻，請(qǐng)輕輕叩擊板框，充分混勻。

8） 檢測(cè)讀數(shù)：在 15分鐘之內(nèi)，使用450nm酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)讀數(shù)。
常用型號(hào)五、試劑組成：